20 squadre di elite provenienti da sei nazioni competono nell'Amlin Challenge Cup in cinque gironi di quattro squadre ciascuno. Le 20 squadre coinvolte nel torneo della stagione 2009/10 sono:
| Francia |
8 squadre francesi |
| Inghleterra |
5 squadre inglesi |
| Italia |
4 squadre italiane |
| Irlanda |
1 squadra irlandese |
| Romania |
1 squadra rumena |
| Spain |
1 squadra spagnola |
La Fase ad Eliminazione Diretta dell'Amlin Challenge Cup ormai include tre squadre che si saranno qualificate tramite la Heineken Cup.
L'introduzione di tre squadre classificate seconde dei loro rispettivi gironi al termine della fase a gironi della Heineken Cup (il terzo, quarto e quinto migliori secondi dei gironi della Heineken Cup) raggiungeranno le cinque squadre vincitrici della fase a gironi dell'Amlin Challenge Cup. Questa nuova struttura permette di incrementare la qualità e il profilo degli incontri della Fase a Gironi dell'Amlin Challenge Cup.
I primi quattro vincitori della Fase a Gironi dell'Amlin Challenge Cup giocheranno i quarti di finale in casa. Il migliore vincitore affronterà il quinto mentre gli altri tre vincitori accoglieranno le squadre della Heineken Cup.
